核酸检测具体操作 *** (核酸检测hiv有没有意义)

一
、核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心 、磁性硅胶颗粒分离 *** 以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解 。DNA应置于-20℃保存
，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存
。

2
、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs 、逆转录酶
、RNA酶抑制剂、DTT 、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板 。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应
。

3
、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs 、DNA聚合酶
、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水 、以及模板。在扩增仪中 ，按照设定的程序进行扩增 。使用二次扩增的套式PCR扩增 *** 
。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析 *** 是琼脂糖凝胶电泳法
，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析 *** 还有限制性内切酶酶切分析
、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等 。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照 、两个阴性对照 ，只有阳性对照扩增出预期的片段
、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立
，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定
。

扩展资料：

检测新型冠状病毒特异序列的 *** 最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前 ，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA 。在PCR反应体系中
，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列 ，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时
，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合 ，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离
，发出荧光
。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关 ，病毒核酸浓度越高
， Ct值越小 。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值
。

参考资料：百度百科——核酸检测法

(图片来源于 *** 侵删）

二 、核酸检测操作流程有哪些

摘要：很多人以为核酸检测就是采集一下就完成了，其实核酸检测远比这复杂的多 ，核酸检测操作流程有采集分泌物
、进行留样、样本送检 、核酸提取
、荧光PCR核酸检测、核酸检测报告
，很多操作步骤都要手工进行，因此需要花费一定的时间。核酸检测的原理是利用荧光定量PCR（聚合酶链式反应） 。接下来本文将简单介绍核酸检测操作流程有哪些以及核酸检测的原理是什么 ，一起来看看吧！一 、核酸检测操作流程有哪些

目前
，全国大部分城市都提供了核酸检测，那么 ，核酸检测要经过哪些步骤呢？下面一起了解下核酸检测操作流程有哪些：

1
、采集分泌物

首先
，医务人员会使用咽拭子擦拭受检者鼻腔或者喉咙扁桃体处，采集唾液分泌物 ，这个过程其实蛮疼的
。

2、进行留样

将人体分泌物采集出来以后，咽拭子浸到保存液中
，将管子盖子旋好进行留样。

3 、样本送检

然后，将样本装入到干净的密封袋中封好 ，送到相关部分进行检测 。

4、核酸提取

相关部门将送来的样本
，送到指定实验室做核酸提取实验
。

5
、荧光PCR核酸检测

核酸提取出来以后，再使用荧光PCR进行检测使用 ，检测是否有扩增反应
，也就是判断阴性还是阳性。

6、出核酸检测报告

最后，根据核酸检测的荧光PCR反应结果 ，得出核酸检测报告
，本人查询结果即可 。

二 、核酸检测的原理是什么

检测新型冠状病毒特异序列的 *** 最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）
。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前 ，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中
，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列 ，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团 。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列
，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解 ，报告基团与淬灭基团分离
，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生
。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关 ，病毒核酸浓度越高
，Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值 。

三
、核酸检测操作流程分享

北京市现在为了彻底减少疫情出现，已经开始全民做核酸检测了 ，目前大家做核酸检测十分的方便
，那么要去哪里做呢？接下来我就给大家带来了核酸检测操作流程分享，一起来看看吧！

核酸检测操作流程分享近期 ，随着北京疫情形势的变化
，北京要求5月30日以来，凡到过北京新发地农贸批发市场或与市场销售人员有过密切接触的人员 ，应主动向单位和社区报告，并开展核酸检测和居家观察
，如有发热、咳嗽 、咽痛等症状，应向单位和社区报告并及时就近前往设有发热门诊的医疗机构就诊
。

目前 ，多家北京医院发布官方通知
，提醒市民至少提前一天预约，按照预约时段错峰就诊。

此外 ，作为在疫情期间全国首家开放线上核酸检测预约服务的平台
，京东健康之一时间响应疫情防控工作的需要，目前通过京东健康线上平台 ，可以在线预约9个核酸检测网点的检测服务
，网点覆盖北京市朝阳区
、海淀区和大兴区等多个地点 。

京东健康平台上可在线购买和预约的核酸检测服务，均由北京市卫健委公布的面向团体和个人提供新冠病毒核酸检测的官方指定机构
。用户通过京东APP搜索“核酸检测
” ，即可进入相关页面
，提前购买检测服务并预约检测采样;采样完成后，最快24小时内即可获取检测结果报告。

四、核酸检测是怎么做的具体是检测什么东西

核酸检测需要去正规的医院或者防疫中心进行检测 。

检测步骤：

1 、首先 ，核酸检测盒子，也就是现在用于新冠状病毒检测的方式
，这个盒子中主要检测“法宝”采用咽拭子
。用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5－10次，且不断旋转拭子。

2
、医务人员进行留样 ，将拭子头浸入细胞保存液中
，折断尾部后立即旋紧管盖子 。

3、保存，将样本管放入密封袋中及时送检 ，而送检过程中需要严格的运输环境
，2－8摄氏度保存
。

4 、操作核酸提取（反应管理），将灭活病毒后的样本进行核酸提取 ，用于后续检测。

5
、荧光PCR核酸检测
，也就是．上机器检测，将提取物进行荧光PCR扩曾反应 ，需要70－－80分钟 。

核酸检测就是通过检测荧光信号的累积
，来确定样本中是否有相应的基因核酸。目前核酸检测试剂盒，多数采用荧光定量PCR ***
。检测原理就是 ，以独特的基因序列，为检测靶标
，通过PCR扩增，使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加 ，每一个扩增出来的DNA序列
，都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号 ，扩增出来的靶基因越多
，累积的荧光信号就越强。如果没有靶基因扩增，因此就检测不到荧光信号增强 。核酸检测试剂盒的组分中 ，检测引物和探针最为关键
。灵敏特异的扩增引物
，对检测结果的准确，与否发挥着至关重要的作用。

五、核酸检测怎么做

核酸检测目前都是取咽拭子的 *** （病毒感染口腔粘膜上皮后会寄宿于口腔粘膜上皮 ，通过采咽拭子达到取样目的）
，1小时内送到专门检测室内进行 。这个性质决定不可能每个患者想做就能立马做，比如大半夜来的患者就做不了 ，只能等待第二天仪器开机
。

取咽拭子是一个高危的操作。据目前临床研究来看，新型冠状病毒感染肺炎的传播途径有三种
，直接传播 、气溶胶传播、接触传播 。其中飞沫混合在空气中，形成气溶胶 ，吸入后导致感染
。所以对于取样的人员而言
，有被感染的风险。

结果判定:

如果测试结果为阴性，患者相对安全 ，但不能完全排除危险（因为可能由于标本质量或者存在抑制物等问题导致结果假阴性）；如果测试结果为阳性
，该患者就有危险性 。之一步和第二步都有严格的操作流程和操作条件
。整体耗时在 1-4小时之间。

目前中南大学湘雅医院的核酸检测一般是 11点开始统一上机，16点左右统一进行结果报告和上报 。在进行核酸检测期间和等待核酸检测期间 ，患者都不能随意离开医院。

如果核酸连续两次复查阴性
，无临床症状，进一步根据病情解除隔离
。如果核酸阳性 ，轻症可以戴好口罩居家隔离
，我们备好了居家隔离建议书，写得非常详细 ，非轻症则必须依法隔离及收治。

扩展资料：

深圳29家医院面向公众开展核酸检测

为了更好防控新冠肺炎，4月9日
，深圳市卫健委公布29家面向公众开展新冠病毒核酸检测的医院名单，如果市民担心感染新冠肺炎 ，可前往检测 。

在核酸采样上
，29家医院将在普通门诊或发热门诊附近设立相对独立的区域作为核酸采样点
。为了避免扎堆采样，市卫健委也鼓励医院采用 *** 预约
、分时段采样、应用移动终端支付费用 、手机短信或微信推送检测结果的方式 ，避免人员在医疗机构聚集。

除了从武汉抵深者
，其他市民如果有需要，也可以前往这些医院检测 ，核酸检测单项服务的价格约为160元（不含诊查费或诊金） 。

以香港大学深圳医院为例
，该院已开通核酸筛查门诊，每天8∶00-20∶00开放 ，市民可直接在“香港大学深圳医院 ”微信公众号预约“核酸筛查门诊
”
。

港大深圳医院的专科门诊诊金为100元/人次
，核酸筛查费用为160元/人次，共260元 ，可使用深圳市一档医保支付，一般24小时可出结果。

参考资料来源：人民网-深圳29家医院面向公众开展核酸检测

参考资料来源：华声在线-中南大学湘雅医院：关于做核酸检测的三个真相