核酸检测操作标准流程(核酸检测为什么不能排除hiv)

一 、核酸检测操作流程有哪些

摘要：很多人以为核酸检测就是采集一下就完成了 ，其实核酸检测远比这复杂的多
，核酸检测操作流程有采集分泌物
、进行留样、样本送检 、核酸提取
、荧光PCR核酸检测、核酸检测报告，很多操作步骤都要手工进行 ，因此需要花费一定的时间 。核酸检测的原理是利用荧光定量PCR（聚合酶链式反应）
。接下来本文将简单介绍核酸检测操作流程有哪些以及核酸检测的原理是什么
，一起来看看吧！一 、核酸检测操作流程有哪些

目前，全国大部分城市都提供了核酸检测 ，那么，核酸检测要经过哪些步骤呢？下面一起了解下核酸检测操作流程有哪些：

1、采集分泌物

首先
，医务人员会使用咽拭子擦拭受检者鼻腔或者喉咙扁桃体处，采集唾液分泌物 ，这个过程其实蛮疼的。

2
、进行留样

将人体分泌物采集出来以后
，咽拭子浸到保存液中，将管子盖子旋好进行留样 。

3、样本送检

然后 ，将样本装入到干净的密封袋中封好
，送到相关部分进行检测
。

4 、核酸提取

(图片来源于 *** 侵删）

相关部门将送来的样本，送到指定实验室做核酸提取实验。

5
、荧光PCR核酸检测

核酸提取出来以后 ，再使用荧光PCR进行检测使用
，检测是否有扩增反应，也就是判断阴性还是阳性 。

6、出核酸检测报告

最后 ，根据核酸检测的荧光PCR反应结果
，得出核酸检测报告，本人查询结果即可。

二 、核酸检测的原理是什么

检测新型冠状病毒特异序列的 *** 最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）
。因PCR反应模板仅为DNA ，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中
，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列 ，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团 。探针完整时
，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合 ，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解
，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光
。

每扩增一条DNA链 ，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关
，病毒核酸浓度越高，Ct值越小 。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值
。

二
、核酸检测流程是什么

1、核酸提取使用硅胶柱离心 、磁性硅胶颗粒分离 *** 以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解 。DNA应置于-20℃保存 ，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存
。

2
、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs 、逆转录酶
、RNA酶抑制剂、DTT 、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板 。在扩增仪或水浴箱中
，在规定的温度和时间下进行逆转录反应
。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物
、dNTPs、DNA聚合酶 、缓冲液
、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增 。使用二次扩增的套式PCR扩增 *** 。

4 、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析 *** 是琼脂糖凝胶电泳法 ，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内
。其它扩增产物分析 *** 还有限制性内切酶酶切分析
、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照 、两个阴性对照
，只有阳性对照扩增出预期的片段
、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定 。

三 、核酸检测操作流程分享

北京市现在为了彻底减少疫情出现 ，已经开始全民做核酸检测了
，目前大家做核酸检测十分的方便，那么要去哪里做呢？接下来我就给大家带来了核酸检测操作流程分享 ，一起来看看吧！

核酸检测操作流程分享近期
，随着北京疫情形势的变化，北京要求5月30日以来 ，凡到过北京新发地农贸批发市场或与市场销售人员有过密切接触的人员
，应主动向单位和社区报告，并开展核酸检测和居家观察 ，如有发热
、咳嗽、咽痛等症状
，应向单位和社区报告并及时就近前往设有发热门诊的医疗机构就诊
。

目前，多家北京医院发布官方通知 ，提醒市民至少提前一天预约，按照预约时段错峰就诊。

此外
，作为在疫情期间全国首家开放线上核酸检测预约服务的平台，京东健康之一时间响应疫情防控工作的需要 ，目前通过京东健康线上平台
，可以在线预约9个核酸检测网点的检测服务，网点覆盖北京市朝阳区 、海淀区和大兴区等多个地点 。

京东健康平台上可在线购买和预约的核酸检测服务 ，均由北京市卫健委公布的面向团体和个人提供新冠病毒核酸检测的官方指定机构
。用户通过京东APP搜索“核酸检测 ”
，即可进入相关页面，提前购买检测服务并预约检测采样;采样完成后 ，最快24小时内即可获取检测结果报告。

四、核酸检测规定及标准

为落实国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控工作的指导意见》（国发明电〔2020〕14号）要求
，进一步规范新型冠状病毒（以下简称新冠病毒）核酸检测的技术人员
、标本采集、标本管理 、实验室检测
、结果报告等工作，保证检测质量 ，提高检测效率
，满足新冠病毒核酸检测需求，特制定本手册 。本手册适用于所有开展新冠病毒核酸检测的医疗机构
。

一、技术人员基本要求

（一）采样人员。从事新冠病毒核酸检测标本采集的技术人员应当经过生物安全培训（培训合格） ，熟悉标本种类和采集 *** ，熟练掌握标本采集操作流程及注意事项
，做好标本信息的记录，确保标本质量符合要求 、标本及相关信息可追溯 。

（二）检测人员
。实验室检测技术人员应当具备相关专业的大专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格 ，并有2年以上的实验室工作经历和基因检验相关培训合格证书。实验室配备的工作人员应当与所开展检测项目及标本量相适宜
，以保证及时
、熟练地进行实验和报告结果，保证结果的准确性 。

二、标本采集基本要求

（一）基本原则。

1.各医疗机构的检测能力应当与门急诊就诊人次 、住院人次等诊疗量相匹配 ，并与采集的标本量相适应
，避免采集数量明显超出检测能力导致的标本积压
、标本失效、检测结果反馈迟缓等问题
。

2.各医疗机构在采集标本时，要根据不同采集对象设置不同的采样区域 ，将发热患者与其他患者 、“愿检尽检
”人群分区采样
，避免交叉感染。

3.标本采集应当在满足本机构发热门诊
、住院患者、陪护人员及院内职工的检测需求基础上，进一步保障其他重点人群“应检尽检”和一般人群“愿检尽检 ”的要求 。

（二）采样点设置
。医疗机构设置新冠病毒采样点应当遵循安全 、科学、便民的原则。采样点应当为独立空间 ，具备通风条件
，内部划分相应的清洁区和污染区，配备手卫生设施或装置 。采样点需设立清晰的指引标识 ，并明确采样流程和注意事项
。设立独立的等候区域，尽可能保证人员单向流动
，落实“1米线
”间隔要求，严控人员密度。

（三）人员配置及防护要求 。每个采样点应当配备1-2名采样人员
。合理安排采样人员轮替 ，原则上每2-4小时轮岗休息1次。采样人员防护装备要求：N95及以上防护口罩
、护目镜、防护服 、乳胶手套
、防水靴套；如果接触患者血液、体液 、分泌物或排泄物
，戴双层乳胶手套；手套被污染时，及时更换外层乳胶手套 。每采一个人应当进行严格手消毒或更换手套
。

（四）采样流程。各医疗机构应当建立新冠病毒核酸检测采样操作流程制度 ，根据采样对象类别确定具体采样流程
，包括预约
、缴费、信息核对 、采样
、送检、报告发放等 。应当利用条码扫描等信息化手段采集受检者信息。标本采集前，采样人员应当对受检者身份信息进行核对 ，并在公共区域以信息公告形式告知核酸检测报告发放时限和发放方式
。每个标本应当至少记录以下信息：1.受检者（患者）姓名 、身份证号
、居住地址、联系方式；2.采样单位名称 、标本编号
，标本采集的日期、时间
、采集部位、类型 、数量等。

（五）采集 *** 。应当采集呼吸道标本，包括上呼吸道标本（口咽拭子
、鼻咽拭子等）或下呼吸道标本（呼吸道吸取物、支气管灌洗液 、肺泡灌洗液
、深咳痰液等）
。其中 ，重症病例优先采集下呼吸道标本；根据临床需要可留取便标本。

1.口咽拭子 。被采集人员先用生理盐水漱口
，采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润(禁止将拭子放入病毒保存液中，避免抗生素引起过敏) ，被采集人员头部微仰，嘴张大
，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体 ，将拭子越过舌根
，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次 ，将拭子头浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中
，尾部弃去，旋紧管盖
。

2.鼻咽拭子。采样人员一手轻扶被采集人员的头部 ，一手执拭子贴鼻孔进入
，沿下鼻道的底部向后缓缓深入，由于鼻道呈弧形 ，不可用力过猛
，以免发生外伤出血 。待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转一周（如遇反射性咳嗽 ，应停留片刻），然后缓缓取出拭子
，将拭子头浸入含2～3ml病毒保存液的管中
。

3.深咳痰液。要求患者深咳后，将咳出的痰液收集于含3ml采样液的50ml螺口塑料管中 。如果痰液未收集于采样液中 ，可在检测前
，加入2～3ml采样液，或加入痰液等体积的痰消化液
。可以采用痰液等体积的含1g/L蛋白酶K的磷酸盐缓冲液将痰液化。

4.鼻咽或呼吸道抽取物 。用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管 ，接通负压
，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液 ，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）
。

5.支气管灌洗液。将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处）
，注入5ml生理盐水，接通负压 ，旋转收集器头部并缓慢退出 。收集抽取的粘液
，并用采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集）
。

6.肺泡灌洗液。局部麻醉后将纤维支气管镜通过口或鼻经过咽部插入右肺中叶或左肺舌段的支管，将其顶端契入支气管分支开口 ，经气管活检孔缓缓加入灭菌生理盐水，每次30～50ml
，总量100～250ml，不应超过300ml 。